Tth UvrD試劑解旋酶來(lái)源于耐熱細(xì)菌，該蛋白具有熱穩(wěn)定條件下3’-5’解旋DNA的能力。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，該酶在高溫的等溫?cái)U(kuò)增中

(thermophilic Helicase- Dependent Amplification，tHDA)，可協(xié)助聚合酶進(jìn)行解鏈，從而完成恒溫?cái)U(kuò)增，其可不依賴于單

鏈結(jié)合蛋白應(yīng)用于恒溫?cái)U(kuò)增。該酶耐受95℃，在95℃條件下加熱10min，仍保留全部活性。本制品為在E.coli中重組表達(dá)純化而

得。

組分

組分名稱100 μg

Tth UvrD Helicase (1 μg/μl)100 μl

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年。

其他注意事項(xiàng)

（1）該酶經(jīng)功能性驗(yàn)證具有解旋活性，解鏈5’突出末端dsDNA活性最高，3’突出末端dsDNA稍弱，平端dsDNA最弱。

（2）測(cè)試反應(yīng)條件為, 0.1pmol/ul的dsDNA, 20mM Tris-HCl,pH7.6, 50mM KCl, 10mM Mg2+, 1mM ATP。

（3）該酶不提供反應(yīng)Buffer，需要根據(jù)特定實(shí)驗(yàn)自行準(zhǔn)備。

（4）更高濃度的酶制品，請(qǐng)來(lái)信詢問索取。

Tth UvrD試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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