全血microRNA提取試劑盒核酸提取的成功與否、提取質(zhì)量的好壞對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)起著至關(guān)重要的作用。使用TRIzol試劑提取總RNA，對(duì)總RNA中包含的部分

小RNA進(jìn)行研究，該方法的缺點(diǎn)是總RNA中microRNA的比例較小，同時(shí)由于mRNA的干擾，會(huì)導(dǎo)致后續(xù)反轉(zhuǎn)錄和RealTime 

PCR實(shí)驗(yàn)效率很低，很難獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，而且結(jié)果并不可靠。在探索miRNA分子功能的過(guò)程中開(kāi)發(fā)的全血

miRNA提取試劑盒，通過(guò)一步上柱即可獲得純度高達(dá)98%的不含大RNA 的miRNA，而且可在45min內(nèi)完成小RNA的提取。

該miRNA提取試劑盒廣泛適用于凍存和新鮮的抗凝全血樣本（不適用于血清和血漿），每150μl全血可獲得~1μg的microRNA

組分

名稱數(shù)量

B1803AB1803B

miRNA Reagent A7.5ml30ml

miRNA Reagent B10ml40ml

miRNA 吸附柱25套100套

RnaseFree TE Buffer5ml5ml

儲(chǔ)存

室溫可保存2年。

全血microRNA提取試劑盒恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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