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細胞到貨——最佳處理時間

更新時間:2025-09-22      點擊次數(shù):170

運輸條件與最佳處理時間

1、常溫運輸(20-25℃)

處理時間:≤24 小時

原因:常溫下細胞代謝活躍,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)(如葡萄糖、氨基酸)會快速消耗,同時乳酸、氨等代謝廢物積累,導(dǎo)致培養(yǎng)基 pH 下降(正常 pH 7.2-7.4,低于 6.8 時細胞活性顯著降低)。若超過 24 小時未處理,細胞可能因酸性環(huán)境或營養(yǎng)匱乏而死亡。

2、冰袋低溫運輸(4-8℃)

處理時間:≤72 小時

原因:低溫可抑制細胞代謝(代謝速率降低 50%-70%),延緩營養(yǎng)消耗和廢物產(chǎn)生,但培養(yǎng)基中的谷氨酰胺仍會緩慢分解產(chǎn)生氨,且長時間低溫可能導(dǎo)致細胞骨架損傷或凋亡。一般建議在 3 天內(nèi)完成處理,若運輸時間超過 72 小時,需提前聯(lián)系供應(yīng)商確認(rèn)細胞狀態(tài)。

3、恒溫 CO?運輸(37℃+5% CO?)

處理時間:≤5 天

原因:恒溫 CO?環(huán)境可維持培養(yǎng)基 pH 穩(wěn)定,細胞能在接近培養(yǎng)箱的條件下存活較長時間,但培養(yǎng)基中的血清成分可能因長時間 37℃儲存而變質(zhì),且細胞持續(xù)增殖可能導(dǎo)致融合度過高(如從 70% 升至 90% 以上),增加消化難度或引發(fā)接觸抑制。

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細胞狀態(tài)與緊急處理情形

1、需立即處理的情況

培養(yǎng)基顏色異常:若培養(yǎng)基變?yōu)樯铧S色(酸性過強)或紫色(堿性過強),提示 pH 已超出細胞耐受范圍,需立刻更換新鮮培養(yǎng)基,避免細胞因酸堿失衡死亡。

培養(yǎng)基渾濁或出現(xiàn)絮狀物:可能是細菌或真菌污染,需立即在生物安全柜中觀察細胞狀態(tài),若細胞貼壁良好且污染不嚴(yán)重,可嘗試用 PBS 洗細胞后更換培養(yǎng)基并添加抗生素(如青霉素 + 鏈霉素);若污染嚴(yán)重,建議丟棄細胞并消毒操作環(huán)境。

細胞大量脫落或變圓:可能因運輸震蕩、溫度波動或代謝紊亂導(dǎo)致細胞損傷,需盡快處理并觀察后續(xù)貼壁情況,必要時進行細胞拯救(如降低消化時間、使用細胞拯救培養(yǎng)基)。

2、可暫緩處理的情況

運輸時間短(如 < 12 小時)且細胞狀態(tài)良好:培養(yǎng)基顏色正常、細胞貼壁均勻,可暫時將細胞放入培養(yǎng)箱(37℃+5% CO?)靜置 1-2 小時,讓細胞適應(yīng)溫度后再進行換液或傳代,避免因溫差刺激導(dǎo)致細胞應(yīng)激。


不同細胞類型的處理時間差異

細胞類型代謝特性建議處理時間注意事項

永生化細胞系

增殖快、代謝活躍

≤24 小時(常溫)

若處理延遲,細胞可能過度增殖至融合度 100%,導(dǎo)致接觸抑制或老化,影響后續(xù)實驗。

原代細胞

增殖慢、對環(huán)境敏感

≤48 小時(低溫)

原代細胞存活率低,長時間運輸后需優(yōu)先評估活性(如臺盼藍染色),并避免頻繁操作。

干細胞

對培養(yǎng)條件要求高

≤36 小時(低溫)

干細胞培養(yǎng)需專用培養(yǎng)基,到貨后若處理延遲,可能因分化或凋亡導(dǎo)致細胞特性改變。


標(biāo)準(zhǔn)處理流程與時間管理建議

到貨后立即執(zhí)行的步驟

30 分鐘內(nèi):開箱檢查包裝是否完好,記錄運輸溫度(如冰袋是否融化、恒溫箱溫度是否達標(biāo)),拍照留存細胞狀態(tài)(培養(yǎng)基顏色、細胞貼壁情況),消毒放入后培養(yǎng)箱穩(wěn)定2-3小時。

2-3小時后:顯微鏡下觀察細胞形態(tài)后,在生物安全柜中打開 T25 瓶:

若細胞貼壁良好、培養(yǎng)基清亮,可吸去部分舊培養(yǎng)基(保留2-3mL),補充新鮮培養(yǎng)基后放入培養(yǎng)箱,24 小時內(nèi)完成第一次換液。

若細胞密度較高(如融合度 > 80%),需立即進行傳代,避免細胞老化。

延遲處理的臨時保存方法

若因?qū)嶒灠才判柩舆t處理(如隔夜),可將細胞放入4℃冰箱臨時保存(最多12小時),并在保存前更換 1/2 體積的新鮮培養(yǎng)基,減少代謝廢物積累;但需注意:4℃保存僅為應(yīng)急措施,不可長期使用,以免細胞活性下降。

總結(jié)

最佳處理時間:常溫運輸細胞應(yīng)在24 小時內(nèi)處理,低溫運輸可放寬至72 小時內(nèi),但需根據(jù)細胞狀態(tài)靈活調(diào)整,出現(xiàn)異常(如培養(yǎng)基變色、污染)時需立即處理。

核心原則:細胞到貨后處理越及時,活性保留越完整,后續(xù)實驗(如增殖、分化、轉(zhuǎn)染)的成功率越高。建議實驗人員提前規(guī)劃時間,確保到貨后能快速響應(yīng),避免因延誤導(dǎo)致細胞損失。


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